聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction，PCR）是一种分子生物学技术，用于体外扩增特定的DN段。
 PCR技术主要过程是，通过人类合成的一小断单链DN段（叫做引物）与模板DNA特定的区域特异性结合，进而以四种dNTP为底物，通过DNA聚合酶沿着引物和模板形成的双链部分的3’端聚合形成DN段实现DNA体外扩增的过程。其中，zui重要的是热稳定的DNA聚合酶，由于该酶在97度以上的高温也能保持稳定，所以我 们可以通过94～97度这个温度范围内处理DNA形成单链，然后降温（根据引物不同而有差异，一般为50-55度）直至适量的引物结合到模板上。zui后温度提升至72度，聚合酶聚合形成双链DNA。
 经典方法
 PCR体系组分
 DNA模板（template），含有需要扩增的DN断。
 2个引物（primer），决定了需要扩增的起始和终止位置。
 DNA聚合酶（polymerase），复制需要扩增的区域。
 脱氧核苷三磷酸（dNTP），是指4种脱氧核糖核酸，用于构造新的互补链。
 缓冲体系，提供适合聚合酶行使功能的化学环境。
 H2O 为了保持各个组分的浓度，在体系中加水稀释
 注意：部分品牌缓冲液不含有Mg2+，那么还需要添加对应浓度的Mg2+。酶请zui后加入，水请zui先加入。
 PCR步骤
 1. DNA变性
 （90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA。
 2. 退火
 （25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
 3. 延伸
 （70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性*）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。
 PCR的循环参数
 1. 预变性（Initial denaturation）
 模板DNA*变性与PCR酶的*激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。
 2. 循环中的变性步骤
 循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列*变性，可能的情况下可 缩短该步骤时间，变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不*，易造成扩增失败。
 3. 引物退火（Primer annealing）
 退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。
 退火温度对PCR的特异性有较大影响。
 4. 引物延伸
 引物延伸一般在72℃进行（Taq酶zui适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略 延伸时间随扩增片段长短而定，一般*在1000 bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1 min/kbp。
 5. 循环数
 大多数PCR含25-40循环，过多易产生非特异扩增。
 6. zui后延伸
 在zui后一个循环后，反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸*，并使单链产物退火成双链。

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